大蛇丸的试炼活动入口位于游戏主界面的决斗场模块中。进入游戏后，点击右下角的决斗场按钮，在决斗场界面下方找到更多玩法选项，滑动右侧任务栏即可看到大蛇丸试炼活动入口。该玩法属于限时活动，参与前需确认活动是否处于开放周期内。
大蛇丸试炼的核心机制为5名玩家对抗1名实验体BOSS的生存挑战。实验体拥有霸体状态且无法被抓取，血量和攻击力极高，因此选择忍者时需优先考虑远程poke型或位移突进型角色。近身体术类忍者因需贴身输出且缺乏逃生手段，极易被实验体反制。推荐的忍者包括干柿鬼鲛、奈良鹿丸、赤砂之蝎等具备远程消耗能力的角色。
战斗过程中需注意实验体的技能释放规律。其一技能为直线型高伤害攻击，存在明显前摇动作，可通过上下走位规避。二技能是唯一远程输出手段，建议保留用于反击时机。当场景进入黑暗模式时，应优先占据地图两侧楼梯或帷幕后方视野盲区，避免在中央区域暴露行踪。若被选为实验体，需利用地图结构进行迂回，通过卡视角消耗对手。
积分计算综合存活时间、伤害输出和击杀数三项数据。若队伍处于劣势，可选择主动让实验体击杀以保留存活时间权重。小型实验体由阵亡玩家转化而来，其技能前后摇明显但大招具有范围收割能力，需保持距离应对。最终排名前三的玩家可获得额外奖励，因此战术上需平衡生存与输出的优先级。
该玩法对操作精度和战场意识要求较高，建议提前在练习场熟悉忍者技能连招。通灵兽选择以控制型为主，用于打断实验体关键技能。秘卷推荐携带霸体或减伤类，提升容错率。多人协作时注意分散站位，避免被范围技能同时命中。通过合理运用地形和技能冷却管理，可显著提高通关效率。
